Thymosin alpha-1 (Tα1) peptide: sequentie en COA

Thymosin alpha-1 (Tα1) is een peptide van 28 aminozuren dat in 1977 voor het eerst werd geïsoleerd uit kalfsthymus door de groep van Allan Goldstein, die al een decennium thymische extracten fractioneerde.

Later bleek het het N-terminale fragment te zijn van een groter eiwit, prothymosin alpha, en een acetylgroep op zijn N-terminus te dragen, een kenmerk dat van belang is op een certificaat.

Dezelfde sequentie wordt sinds de jaren 1980 synthetisch geproduceerd en is in verschillende landen geregistreerd onder de handelsnaam Zadaxin.

Wat als thymosin alpha-1 voor onderzoek wordt verkocht, is het identieke 28-residu geacetyleerde peptide, gemaakt door vastfase-synthese, gezuiverd door preparatieve HPLC en gevriesdroogd. Alleen voor onderzoeksdoeleinden.

Niet voor menselijk of dierlijk gebruik.

Drie catalogusvermeldingen dragen het woord "thymosin" of "thym-", en kopers vragen regelmatig om het ene terwijl ze het andere bedoelen. Het zijn drie verschillende objecten.

De alfa- en bèta-thymosinen zijn ongerelateerde sequenties die toevallig zijn geïsoleerd uit dezelfde bereiding van hetzelfde weefsel (thymosinefractie 5, een kalfsthymusextract dat voor het eerst in de jaren 1960 werd bereid), wat de enige reden is dat ze een naam delen.

Thymalin is de ruwe fractie waaruit ze werden geïsoleerd.

Een vermelding die thymosin alpha-1 beschrijft met de eigenschappen van TB-500, of die thymalin een enkele moleculaire massa geeft, heeft de drie verward.

Het zeven-residu peptide heeft zijn eigen gids: TB-500 peptide: sequentie, COA, formaten.

De N-terminale serine van thymosin alpha-1 draagt een acetylgroep (CH₃CO-), toegevoegd tijdens de synthese als laatste stap op de hars. Het verandert drie dingen die een certificaat rapporteert.

• Massa. De acetyl voegt 42,0 dalton toe. Een "thymosin alpha-1" waarvan de massa reconstrueert naar 3.066,3 in plaats van 3.108,3 was nooit geacetyleerd en is het des-acetyl peptide, een ander molecuul.
• HPLC. Het geacetyleerde peptide heeft geen vrije N-terminale amine, dus het elueert iets later dan de des-acetyl vorm op omgekeerde fase. Een onvolledige acetylering toont zich als een kleine piek net voor de hoofdpiek; een goed gemaakte partij toont dit onder 0,5 %.
• Stabiliteit. Zonder een vrije amine aan de N-terminus is het peptide geen substraat voor aminopeptidasen en ondergaat het niet de N-terminale bijwerkingen (diketopiperazinevorming) die de houdbaarheid van sommige sequenties verkorten. Op de plank is het een van de beter gedragen peptiden van zijn grootte.

De sequentie bevat geen methionine, cysteine of tryptofaan, dus oxidatie is niet het probleem dat het is voor sermorelin.

Zijn negen zure residuen maken het wel sterk hygroscopisch als acetaatzout, daarom is een verzegelde flacon belangrijker voor dit peptide dan voor de meeste.

HPLC-zuiverheid: één hoofdpiek

Op omgekeerde-fase HPLC elueert het peptide als een enkele hoofdpiek; het zuiverheidscijfer is het oppervlak van die piek ten opzichte van alle pieken.

Boven 99 % is de specificatie voor de cataloguspartijen.

De onzuiverheden om op te letten zijn het des-acetyl peptide (elueert net daarvoor), deletiesequenties uit de synthese (een keten die één residu mist) en, voor een peptide met zoveel glutamaat- en aspartaatresiduen, aspartimide-gerelateerde bijproducten die dicht bij de hoofdpiek elueren.

Massaspectrometrie: 3.108,3

Een peptide van deze grootte en lading wordt door elektrospray-ionisatie gezien als meervoudig geladen ionen, in negatieve modus even gemakkelijk als in positieve; het rapport vermeldt de waargenomen ionen en de gedeconvolueerde massa.

Voor thymosin alpha-1 zijn de verwachte waarden in positieve modus ongeveer m/z 1.037,1 voor [M+3H]³⁺ en 778,1 voor [M+4H]⁴⁺, beide reconstruerend naar 3.108,3. Een gedeconvolueerde 3.066 is de des-acetyl vorm.

Netto peptidegehalte, water, endotoxine

Netto gehalte (door aminozuuranalyse of UV) vertelt hoeveel van de gelabelde milligrammen peptide zijn; met slechts vier basische residuen om acetaat-tegenionen te dragen, is 85 tot 90 % typisch voor deze sequentie, hoger dan voor een basisch peptide.

Water (Karl Fischer) is typisch 3 tot 8 % in een gelyofiliseerde koek en stijgt snel in een geopende flacon van dit hygroscopische zout.

Endotoxine (LAL, in EU/mg) zegt of het water en glaswerk van de vulling schoon waren.

Wat verder op de pagina moet staan

• De naam van het laboratorium en een verifieerbaar testnummer (Janoshik Analytical is de referentie in deze markt).
• Het partijnummer, met het taaknummer en de verificatiesleutel die het laboratorium bevestigt.
• De testdatum en een foto van de geteste flacon met het etiket van de leverancier. Een certificaat voor een kale flacon van de fabrikant zegt niets over het eindproduct.

De OXpeptides Janoshik-rapporten worden per grootte gepubliceerd in de COA-bibliotheek en op de thymosin alpha-1 productpagina zodra elk rapport terugkomt van het laboratorium.

De methode per veld staat in hoe een peptide-COA lezen.

Thymosin alpha-1 wordt op voorraad gehouden in één formaat, 10 mg: 10 mg van een 3,1 kDa peptide is 3,2 micromol.

De cataloguskaart bovenaan deze pagina toont de actuele prijs. Volumekortingen gelden vanaf twee flacons (−5 % vanaf 2, −8 % vanaf 3), en de abonnementsprijs geldt voor elke levering.

Wat de prijs bij OXpeptides omvat: een verzegelde, gelabelde flacon, analyse in uitvoering, verslag wordt gepubliceerd zodra het ontvangen is, en een vervanging als het pakket verloren of beschadigd aankomt.

Verzonden vanuit de EU, traceerbaar: € 9,90, gratis vanaf € 120.

Zie thymosin alpha-1 in de catalogus →

• Temperatuur: −20 °C voor langdurige opslag; een koelkast (2 tot 8 °C) voor enkele weken.
• Vocht: het punt om op te letten bij dit peptide. Negen zure residuen maken het acetaatzout sterk hygroscopisch; houd de flacon verzegeld en in zijn doos, en laat een koude flacon kamertemperatuur bereiken voordat hij zijn zak verlaat zodat er geen water condenseert op het glas.
• Licht en zuurstof: geen oxideerbaar residu in de sequentie; de gebruikelijke gesloten doos is voldoende.
• Houdbaarheid: 24 maanden voor een verzegelde gelyofiliseerde flacon die koud wordt bewaard; de datum op het etiket is bepalend.

Enkele dagen transport op kamertemperatuur degraderen het verzegelde poeder niet. De regels per verbinding staan in gelyofiliseerde peptiden: opslag en houdbaarheid.

"Thymosin alpha 1" geeft encyclopedische pagina's, tijdschriftartikelen en klinieken terug voordat het een onderzoekleverancier teruggeeft.

Voor een laboratorium dat het reagens nodig heeft, beantwoordt de vermelding die ertoe doet vijf vragen op de pagina zelf.

1. Is het het juiste molecuul? 28 residuen, geacetyleerd, 3.108,3 g/mol. Niet TB-500 (889), niet thymalin (een mengsel).
2. Is er een batch-COA van een genoemd onafhankelijk laboratorium, verifieerbaar op de site van het lab, met HPLC-zuiverheid, de massa bij 3.108,3 en netto peptidegehalte?
3. Toont de COA de eigen gelabelde flacon van de leverancier, en draagt deze een taaknummer en verificatiesleutel die het laboratorium bevestigt?
4. Verzendt de flacon vanuit Europese voorraad, getraceerd, binnen enkele dagen? De catalogus wordt verzonden vanuit onze EU-voorraad, getraceerd, naar de Europese Unie en Noorwegen.
5. Beschrijft de pagina alleen het reagens (sequentie, zuiverheidsdocumentatie, opslag), met "Alleen voor onderzoeksdoeleinden. Niet voor menselijk of dierlijk gebruik." duidelijk vermeld? Een leverancier die gebruikscontent publiceert, is een leverancier die gemakkelijk kan worden gesloten, en dat risico ligt bij de koper wiens pakket onderweg is.

De zevenpuntsmethode staat in hoe controleer je een peptideleverancier; de Europa-brede checklist in hoe controleer je een peptideleverancier.